MTT法：

1、將配制好的1×105/mL細胞懸液接種于96孔板，設空白對照、陰性對照、陽性對照和供試品組，每組各設至少6孔，每孔接種100uL細胞懸液，置CO2培養箱（含體積分數5%二氧化碳氣體）37℃培養24h。

2、 培養24h后棄去原培養液，空白對照組加入新鮮細胞培養液，陰性對照組加入陰性對照品浸提液，陽性對照組加入陽性對照溶液或陽性對照品浸提液，供試品組分別加入100uL不同濃度的樣品浸提液（100%、75%、50%、25%），置CO2培養箱繼續培養24h。

3、 更換培養液24h后，置顯微鏡下觀察細胞形態。每孔加入50uL質量濃度為1mg/mL的MTT溶液，繼續培養2h后棄去孔內液體，加入100uL異丙醇，置振蕩器上振蕩，在酶標儀570nm和650nm波長下測定吸光度，計算相對增殖率（RGR）。

直接接觸法：

1、 將已培養 48h～72h 生長旺盛的細胞用消化液消化后加入細胞培養液，用移液槍吹打混勻后在顯微鏡下計數，將細胞懸液配制成密度 1.0×105/mL，接種于直徑 35mm 培養皿，每皿 2mL，共 9 皿。置 CO2培養箱 （5%CO2，37℃，＞90%濕度）培養至近匯合單層細胞形成。 

2、 棄去原培養液。加入 2mL 新鮮培養基，在培養皿中央部位的細胞層上輕輕放置一片供試樣品，共 3 皿。 同法操作陰性對照、陽性對照各 3 皿。置 CO2培養箱（5%CO2，37℃，＞90%濕度）繼續培養 24h。 

3、 培養結束后，于顯微鏡下觀察細胞形態、空泡形成、脫落、細胞溶解和膜完整性等方面的變化，根據以下標準判斷試驗樣品分級，分級大于 2 級時被認為有細胞毒性作用。

瓊脂擴散法：

1、將已培養48h～72h生長旺盛的細胞用消化液消化后加入細胞培養液，用移液槍吹打混勻后在顯微鏡下計數，將細胞懸液配制成密度1.0×105/mL，接種于直徑35mm培養皿，每皿2mL，共9皿。置CO2培養箱（5%CO2，37℃，＞90%濕度）培養至近匯合單層細胞形成。

2、棄去器皿中的培養基，將溶化瓊脂與含血清的新鮮培養基混合,使瓊脂最終質量濃度為0.5%～2%,并吸取適宜體積加入至每只培養皿內。細胞培養只能使用適合于哺乳動物細胞生長的瓊脂。這種瓊脂/培養基的混合物宜為液態,并且溫度適合于哺乳動物細胞。加入2mL中性紅液并在CO2培養箱孵育30min，孵育后丟棄多余的中性紅液，將試驗樣品的平行試樣小心地放在每只培養皿的固化瓊脂層上,確保試樣覆蓋細胞層表面約十分之一，共3皿。同法操作陰性對照、陽性對照各3皿。置CO2培養箱（5%CO2，37℃，＞90%濕度）繼續培養24h。 

3、培養結束后，將培養皿上的試樣小心地從固化瓊脂層取下，于顯微鏡下觀察培養皿中細胞形態、空泡形成、脫落、細胞溶解和膜完整性等方面的變化，根據表1判斷試驗樣品分級，分級大于2級時被認為有細胞毒性作用。

檢測標準：

醫療器械生物學評價 第5部分：體外細胞毒性試驗	GB/T 16886.5-2017
醫療器械生物學評價 第5部分：體外細胞毒性試驗	ISO 10993-5：2009
醫用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學試驗方法	GB/T 14233.2-2005 8
醫用有機硅材料生物學評價試驗方法	GB/T 16175-2008 5